PMEC制藥設備展了解到,研究人員研究出了一種通用的親和(生物親和)層析方法,該方法可通過紫外光進行重組蛋白純化。
使用興奮成像(光控單步蛋白質純化)不需要這些過程中標準的競爭試劑或苛刻的緩沖條件。它在天然緩沖條件下便可運行,并可以以高通量方式運行。
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偶氮苯基團化學品具有光開關形狀和結合特性。能夠在光照的生理緩沖液 soley 中從層析基質中特異性洗脫目標蛋白 (POI)。有結構的顯著變化,因此,Pap 的偶氮苯部分與 α-CD 基質之間的親和力。
PMEC制藥設備展了解到,該方法中使用的光響應 Azo 標簽由“含有 p-(苯基拉唑)-L-苯丙氨酸 (Pap) 的短肽組成,其側鏈可以通過用溫和的紫外線照射從其跨式基態(tài)切換到亞穩(wěn)順式構型”。
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Azo 標簽可以通過基因克隆輕松實現(xiàn)到 POI 中。能夠一步純化 POI,從復雜的生物樣品或提取物中以相當或優(yōu)于已建立系統(tǒng)的質量達到均一性。
色譜法分析
在研究過程中,該團隊觀察到分離效率很高。可以通過α-CD 基質對大多數(shù)細菌宿主細胞蛋白(或常見的代謝輔因子)或細胞培養(yǎng)蛋白缺乏背景結合活性來解釋,這些蛋白在溫和的緩沖液流下會迅速從色譜柱中沖出。
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對于兩種不同的顏色強烈的報告蛋白 mScarlet 和 Azurin,α-CD 親和層析與 N 端和 C 端 Azo 標簽相似,后者的性能略好。
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PMEC制藥設備展了解到,另一方面,N 端標記的 [超級文件夾 GFP (sfGFP)] 的光誘導純化與其他 POI 相當,而帶有 C 端 Azo 標簽的 α-CD 親和柱上的保留性大大降低。對于單體酶 AmpC,情況恰恰相反。
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未來的潛在應用
Mayrhofer 等人表示,實現(xiàn)廉價 LED 器件的簡單性應該會帶來更智能的應用。
作者認為,根據(jù)研究結果,SPOT 巴氏肽篩選和 Azo 標簽的情況,理論上在 POI 的 N 端和 C 端都起作用。因此,未來的潛在應用可以將 Pap 側鏈暴露在蛋白質表面的其他位置,或作為融合蛋白中接頭的一部分,前提是有足夠的空間可及性。
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該團隊表示,激振成像的進一步應用范圍從用于研究目的的臺式一步蛋白純化到微量滴定板中的自動化高通量篩選活動。Mayrhofer 等人表示,用例甚至可以達到使用允許內部照明的色譜柱設置,通過光導體,從色譜床內進行照明。
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