PMEC制藥設(shè)備展了解到，研究人員研究出了一種通用的親和（生物親和）層析方法，該方法可通過紫外光進(jìn)行重組蛋白純化。

使用興奮成像（光控單步蛋白質(zhì)純化）不需要這些過程中標(biāo)準(zhǔn)的競(jìng)爭(zhēng)試劑或苛刻的緩沖條件。它在天然緩沖條件下便可運(yùn)行，并可以以高通量方式運(yùn)行。

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偶氮苯基團(tuán)化學(xué)品具有光開關(guān)形狀和結(jié)合特性。能夠在光照的生理緩沖液 soley 中從層析基質(zhì)中特異性洗脫目標(biāo)蛋白 （POI）。有結(jié)構(gòu)的顯著變化，因此，Pap 的偶氮苯部分與 α-CD 基質(zhì)之間的親和力。

PMEC制藥設(shè)備展了解到，該方法中使用的光響應(yīng) Azo 標(biāo)簽由“含有 p-（苯基拉唑）-L-苯丙氨酸 （Pap） 的短肽組成，其側(cè)鏈可以通過用溫和的紫外線照射從其跨式基態(tài)切換到亞穩(wěn)順式構(gòu)型”。

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Azo 標(biāo)簽可以通過基因克隆輕松實(shí)現(xiàn)到 POI 中。能夠一步純化 POI，從復(fù)雜的生物樣品或提取物中以相當(dāng)或優(yōu)于已建立系統(tǒng)的質(zhì)量達(dá)到均一性。

色譜法分析

在研究過程中，該團(tuán)隊(duì)觀察到分離效率很高。可以通過α-CD 基質(zhì)對(duì)大多數(shù)細(xì)菌宿主細(xì)胞蛋白（或常見的代謝輔因子）或細(xì)胞培養(yǎng)蛋白缺乏背景結(jié)合活性來解釋，這些蛋白在溫和的緩沖液流下會(huì)迅速?gòu)纳V柱中沖出。

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對(duì)于兩種不同的顏色強(qiáng)烈的報(bào)告蛋白 mScarlet 和 Azurin，α-CD 親和層析與 N 端和 C 端 Azo 標(biāo)簽相似，后者的性能略好。

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PMEC制藥設(shè)備展了解到，另一方面，N 端標(biāo)記的 [超級(jí)文件夾 GFP （sfGFP）] 的光誘導(dǎo)純化與其他 POI 相當(dāng)，而帶有 C 端 Azo 標(biāo)簽的 α-CD 親和柱上的保留性大大降低。對(duì)于單體酶 AmpC，情況恰恰相反。

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未來的潛在應(yīng)用

Mayrhofer 等人表示，實(shí)現(xiàn)廉價(jià) LED 器件的簡(jiǎn)單性應(yīng)該會(huì)帶來更智能的應(yīng)用。

作者認(rèn)為，根據(jù)研究結(jié)果，SPOT 巴氏肽篩選和 Azo 標(biāo)簽的情況，理論上在 POI 的 N 端和 C 端都起作用。因此，未來的潛在應(yīng)用可以將 Pap 側(cè)鏈暴露在蛋白質(zhì)表面的其他位置，或作為融合蛋白中接頭的一部分，前提是有足夠的空間可及性。

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該團(tuán)隊(duì)表示，激振成像的進(jìn)一步應(yīng)用范圍從用于研究目的的臺(tái)式一步蛋白純化到微量滴定板中的自動(dòng)化高通量篩選活動(dòng)。Mayrhofer 等人表示，用例甚至可以達(dá)到使用允許內(nèi)部照明的色譜柱設(shè)置，通過光導(dǎo)體，從色譜床內(nèi)進(jìn)行照明。

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